999久久久蜜桃TV,国产精品禁18久久久久久 ,久久久亚洲精品成人7777,久久处女精品,激情亚洲一区国产精品久久久久,国产乱伦操第一页,一级强奸操逼片一区二区三区,产国传媒91一区久久无码,国产极品美女到高潮无套久久,色色欧美色色

0 前言

隨著人民生活水平的提高，健康已逐漸成為提高生活質(zhì)量的主要方面。SARS、禽流感等傳染性疾病的流行，給國人敲響了警鐘，控制和消除病菌的傳播成為各個領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。開發(fā)抗菌涂料對于促進(jìn)公共衛(wèi)生水平和提高國民健康水平具有重要意義中國涂料在線coatingol.com。江蘇晨光涂料有限公司積極參加了中國建筑材料科學(xué)研究總院負(fù)責(zé)起草、歸口于全國涂料和顏料標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會的《抗菌涂料》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的制訂工作，并結(jié)合企業(yè)實(shí)際經(jīng)驗(yàn)提出了若干修改意見。該行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)已于2007 年1 月5 日通過審查。本文根據(jù)最新的《抗菌涂料》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，針對我國中小型涂料企業(yè)的實(shí)際情況，介紹一種抗菌涂料抗菌性能檢測的改進(jìn)實(shí)驗(yàn)操作方法并進(jìn)行了討論。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試驗(yàn)原料及儀器

1.1.1 材料

實(shí)驗(yàn)菌種：金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）ATCC6538、大腸埃希氏菌（Escherichia coli）ATCC25922，江蘇省衛(wèi)生防疫站。納米抗菌內(nèi)墻乳膠漆、抗菌防霉抗藻防腐多功能納米環(huán)保涂料、納米銀抗菌內(nèi)墻涂料、納米復(fù)合多功能內(nèi)墻涂料、納米抗菌紫外光固化漆、納米抗菌水性木器漆，均為江蘇晨光涂料有限公司產(chǎn)品。PBS 磷酸鹽緩沖液（0.03 mol/L，pH=7.2~7.4）、

無菌檢驗(yàn)用洗脫液、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，MH 瓊脂培養(yǎng)基。

1.1.2 儀器設(shè)備

刻度吸管、毛細(xì)吸管、數(shù)字連續(xù)可調(diào)式移液器（簡稱移液槍，10~1 000 μL）、滅菌平皿、滅菌試管、滅菌移液管、接種環(huán)、酒精燈，微量加樣器（1 μL）、聚乙烯薄膜（40±2）mm×（40±2）mm，厚度0.05~0.10 mm。離心機(jī)、電動混合器、恒溫培養(yǎng)箱（37±1）℃、冷藏箱（0~5）℃、超凈工作臺、生物光學(xué)顯微鏡、壓力蒸汽滅菌器、電熱干燥箱。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌種保藏與活化

將菌種接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上，在（37±1）℃下培養(yǎng)24 h 后，在（0~5）℃下保藏（不得超過1 個月），作為斜面保藏菌。將斜面保藏菌轉(zhuǎn)接到平板營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，在（37±1）℃下培養(yǎng)24 h。試驗(yàn)時應(yīng)采用3-14 代內(nèi)轉(zhuǎn)接的新鮮細(xì)菌培養(yǎng)物。

1.2.2 菌懸液制備

用接種環(huán)從轉(zhuǎn)接培養(yǎng)基上取少量（刮1~2 環(huán)）新鮮細(xì)菌，加入磷酸鹽緩沖液（PBS）中，并依次做10 倍遞增稀釋液，選擇菌液濃度為（5.0~10.0）×105 cfu/mL 的稀釋液作為試驗(yàn)用菌液，按GB/T

4789.2 規(guī)定的方法操作。

1.2.3 涂料樣板制備

涂料樣板制備按GB/T 1756 進(jìn)行，施涂和干燥方法照實(shí)際使用的厚度和方法。試驗(yàn)樣板大小為50 mm×50 mm，可選涂料實(shí)際使用的底材（例如金屬板和塑料板），底材不耐水或有吸濕性時可使用玻璃板。涂刷好的樣板需在試驗(yàn)前進(jìn)行消毒。

1.2.4 試驗(yàn)步驟

分別取0.2 mL 試驗(yàn)用菌液滴加在陰性空白樣板（編號O）、無抗菌成分的涂料空白對照樣品（編號A）和抗菌涂料樣品（編號B）上，每個樣品至少做5 個平行實(shí)驗(yàn)。用滅菌鑷子夾起滅菌覆蓋膜分別覆蓋在樣品O、A、B 上，要鋪平，使菌液均勻接觸樣品，置于滅菌平皿中，在相對濕度大于90％，溫度（36±1）℃的恒溫箱中培養(yǎng)24 h。將培養(yǎng)24 h后的樣品O、A、B及其覆蓋膜取出，分別放入已滅菌的100 mL燒杯中，并分別加入50 mLPBS 溶液，反復(fù)沖洗各樣品及覆蓋膜（最好用鑷子夾起薄膜沖洗），充分搖勻后，得到稀釋度為100 的菌懸液；取1 mL 稀釋度為100 的菌懸液于滅菌試管中，用PBS 溶液進(jìn)行10 倍梯度稀釋，得到稀釋度10-1、10-2、10-3 的菌懸液。各取稀釋梯度為100、10-1、10-2、10-3 的菌懸液1 mL，接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA）中，在（37±1）℃下培養(yǎng)24~48 h 后活菌計數(shù)，按GB/T 4789.2 規(guī)定的方法測定活菌數(shù)。

1.3 檢測結(jié)果計算和誤差分析

1.3.1 抗菌率的計算

將陰性對照樣品O、空白對照樣品A和抗菌涂料樣品B 培養(yǎng)24 h 后的實(shí)際回收活菌數(shù)值記為數(shù)值O、A 和B（cfu/片），按下式計算抗菌涂料的抗菌率：

抗菌率R（％）=100×（A-B）/ A

1.3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差分析

樣品A 的5 個平行活菌數(shù)值要符合 ［（最高對數(shù)值- 最低對數(shù)值）/ 平均活菌數(shù)值對數(shù)值］不大于0.3；樣品O 的實(shí)際回收活菌數(shù)值O 不小于1.0×105，且樣品A 的實(shí)際回收活菌數(shù)值A(chǔ) 不小于1.0×104，否則試驗(yàn)結(jié)果無效。在活菌計數(shù)中因技術(shù)和操作而引起的菌落數(shù)誤差率（平板間、稀釋度間）不宜超過10%，誤差率按以下公式計算。

（1）平板間（相同稀釋度下的平行樣板）誤差率計算公式：

2 結(jié)果與討論

按標(biāo)準(zhǔn)的抗菌檢測方法實(shí)驗(yàn)操作［1，2］，需要在1.2.2 和1.2.4 步驟中進(jìn)行兩次10 倍梯度稀釋，以1.2.4 步驟為例，其具體操作方法為：先將試管按需要數(shù)量分組排列于試管架上，每管加入4.5 mL 稀釋液。各組由左向右，逐管標(biāo)上10-1、10-2、10-3……等；再將菌懸液樣本用電動混合器混合20 s（或在手掌上用力振敲80 次），隨即用洗耳球和吸管吸取0.5 mL 加至10-1 管內(nèi)；將10-1 管用電動混合器混合20 s（或在手掌上用力振敲80 次），混勻，再吸取出0.5 mL 加入10-2 管內(nèi)；依此類推，直至最后一管（每個樣品均有3 組對照，每個對照5 組平行，梯度稀釋至10-3 即需45 個試管），而且全部操作過程均需在嚴(yán)格無菌狀態(tài)下進(jìn)行。該操作過程繁瑣費(fèi)時，工作量大，對實(shí)驗(yàn)人員操作水平和熟練程度依賴性極高，直接影響檢測效率和結(jié)果的精度。

針對上述情況，在進(jìn)行梯度稀釋時，改為采用移液槍，如在1.2.4 步驟每次精確吸取50 μL，加入到裝有450 μL 稀釋液的1.5 mL 離心管中。由于移液槍只需一次性定容便可連續(xù)吸取相同體積，且離心管因體積小更易于振蕩均勻，故而簡化了操作，減輕了工作強(qiáng)度，降低了系統(tǒng)誤差。移液槍的吸管和離心管均為一次性用品，還減輕了實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備和后處理的工作量。此外，采用預(yù)制培養(yǎng)基平皿再進(jìn)行涂布平板活菌快速計數(shù)［3-5］，可將活菌計數(shù)時間縮短到10~12 h，從而提高了樣品檢測速率。以江蘇晨光涂料有限公司生產(chǎn)的納米抗菌水性木器漆對大腸埃希氏菌ATCC25922 為例，經(jīng)改進(jìn)后的方法與原方法的檢測結(jié)果對比見表1。

表1 納米抗菌水性木器漆不同抗菌率

注：1、包括實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、器材滅菌、無菌操作和器材清洗在內(nèi)的整個操作過程所需時間。

2、指實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果平均值與廣東省微生物分析檢測中心檢測結(jié)果的差值。

在表1 中，分別采用了3 組熟練人員（指經(jīng)過專業(yè)部門培訓(xùn)或有相關(guān)專業(yè)基礎(chǔ)，并有12 個月以上的實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn)）和非熟練人員（無任何專業(yè)背景和基礎(chǔ)，僅進(jìn)行了3 周的臨時培訓(xùn)）對同一批樣品進(jìn)行對比測試。由于采用移液槍和離心管進(jìn)行菌液的梯度稀釋，簡化了實(shí)驗(yàn)操作，縮短了實(shí)驗(yàn)時間，還有效降低了平板間和稀釋度間誤差率，使非熟練人員的測試結(jié)果也達(dá)到了實(shí)驗(yàn)誤差要求，從而減少了檢測結(jié)果對人員操作的依賴性。采用改進(jìn)方法的另一個優(yōu)點(diǎn)是降低了實(shí)驗(yàn)過程中的雜菌污染率。在表1 中，改進(jìn)方法的稀釋度間誤差率明顯高于平板間誤差率，而傳統(tǒng)方法的結(jié)果正好相反。這是因?yàn)槠桨彘g誤差率對人員操作更敏感，而移液槍的吸管和離心管均為有機(jī)塑料制品，相對于傳統(tǒng)方法中使用的無機(jī)玻璃吸管和試管，其對菌體的吸附性較強(qiáng)，增大了倍率稀釋過程的系統(tǒng)誤差。

為進(jìn)一步提高操作效率，減少梯度稀釋的工作強(qiáng)度，采用移液槍和微量加樣器配合進(jìn)行了1∶10、1∶100 和1∶1 000 倍梯度稀釋比的試驗(yàn)對比。如圖1 所示，通過6 種不同抗菌涂料樣品分別做3 種不同稀釋梯度比的抗菌檢測，發(fā)現(xiàn)隨著稀釋梯度比的增加，實(shí)驗(yàn)平均誤差增大，特別是按1∶1 000 倍梯度比稀釋檢測時誤差明顯增大，其稀釋度間誤差率超過10%。在該稀釋倍率下，需用微量加樣器吸取1.0 μL 菌液加入到盛有999 μL 稀釋液的離心管中，吸取的菌液體積過低，取樣均勻性差，造成取樣的相對誤差被放大，而導(dǎo)致系統(tǒng)誤差增大。因此檢測

實(shí)用的稀釋梯度倍率不宜超過100。

影響檢測結(jié)果精度的另一個關(guān)鍵操作步驟是1.2.4 步驟中滴加菌液至樣板上再覆膜。滴加的菌液中活菌數(shù)應(yīng)在1.0×105~1.0×106cfu 之間，滴加的菌液體積應(yīng)在50~200 μL 之間，低于50 μL 時易造成菌液中的水分在培養(yǎng)過程中蒸發(fā)損失過大而導(dǎo)致陰性空白對照樣品的活菌數(shù)過低；超過200 μL 后易產(chǎn)生覆膜漂起脫落或菌液溢出覆膜邊緣的現(xiàn)象而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。樣板底材的選擇也需注意避免對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，具有多孔結(jié)構(gòu)、有吸水吸濕能力或有強(qiáng)吸附力的底材會使樣板上的菌液洗脫不徹底，空白對照樣品的活菌數(shù)偏低；有些金屬底材易與菌液發(fā)生反應(yīng)或滲出金屬離子影響測試結(jié)果，故應(yīng)盡量選用惰性耐水的底材制備樣板。對江蘇晨光涂料有限公司的納米抗菌內(nèi)墻乳膠漆、抗菌防霉抗藻防腐多功能納米環(huán)保涂料、納米銀抗菌內(nèi)墻涂料、納米復(fù)合多功能內(nèi)墻涂料、納米抗菌紫外光固化漆和納米抗菌水性木器漆等6 種抗菌涂料分別用傳統(tǒng)方法和改進(jìn)方法進(jìn)行檢測，其結(jié)果與廣東微生物分析檢測中心的權(quán)威檢測結(jié)果的對比見表2。其中改進(jìn)方法的結(jié)果更接近于廣東

微生物分析檢測中心的結(jié)果，這表明該檢測方法精度可靠。

菌液中的水分在培養(yǎng)過程中蒸發(fā)損失過大而導(dǎo)致陰性空白對照樣品的活菌數(shù)過低；超過200 μL 后易產(chǎn)生覆膜漂起脫落或菌液溢出覆膜邊緣的現(xiàn)象而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。樣板底材的選擇也需注意避免對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，具有多孔結(jié)構(gòu)、有吸水吸濕能力或有強(qiáng)吸附力的底材會使樣板上的菌液洗脫不徹底，空白對照樣品的活菌數(shù)偏低；有些金屬底材易與菌液發(fā)生反應(yīng)或滲出金屬離子影響測試結(jié)果，故應(yīng)盡量選用惰性耐水的底材制備樣板。對江蘇晨光涂料有限公司的納米抗菌內(nèi)墻乳膠漆、抗菌防霉抗藻防腐多功能納米環(huán)保涂料、納米銀抗菌內(nèi)墻涂料、納米復(fù)合多功能內(nèi)墻涂料、納米抗菌紫外光固化漆和納米抗菌水性木器漆等6 種抗菌涂料分別用傳統(tǒng)方法和改進(jìn)方法進(jìn)行檢測，其結(jié)果與廣東微生物分析檢測中心的權(quán)威檢測結(jié)果的對比見表2。其中改進(jìn)方法的結(jié)果更接近于廣

東微生物分析檢測中心的結(jié)果，這表明該檢測方法精度可靠。

3 結(jié)語

根據(jù)《抗菌涂料》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，參考《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002 版）、《QB/T 2591—2003 抗菌塑料——抗菌性能試驗(yàn)方法和抗菌效果》和《JC/T 897—2002抗菌陶瓷制品抗菌性能》中的抗菌性能檢測方法，結(jié)合中小型涂料企業(yè)的實(shí)際和要求，以抗細(xì)菌性能檢測為例，介紹了一種抗菌涂料的抗菌性能檢測方法。通過改進(jìn)操作方法，在保障檢測結(jié)果精度的前提下，不僅提高了檢測效率，還降低了測試結(jié)果對人員操作水平和熟練程度的依賴性。采用該抗菌性能檢測方法，全套硬件設(shè)備投資可控制在10 萬元以內(nèi)，配備檢測人員1~2 人，經(jīng)2~3 周培訓(xùn)上崗，即可滿足企業(yè)常規(guī)產(chǎn)品性能檢測要求，非常適合于國內(nèi)廣大中小型涂料企業(yè)。